Establishment and characterisation of a new cell line derived from Culex quinquefasciatus (Diptera: Culicidae)

Insect cell cultures are an important biotechnological tool for basic and applied studies. The objective of this work was to establish and characterise a new cell line from Culex quinquefasciatus embryonic tissues. Embryonated eggs were taken as a source of tissue to make explants that were seeded in L-15, Grace's, Grace's/L-15, MM/VP12, Schneider's and DMEM culture media with a pH range from 6.7-6.9 and incubated at 28ºC. The morphological, cytogenetic, biochemical and molecular characteristics of the cell cultures were examined by observing the cell shapes, obtaining the karyotypes, using a cellulose-acetate electrophoretic system and performing random amplified polymorphic DNA-polymerase chain reaction analysis, respectively. The Grace's/L-15 medium provided the optimal nutritional conditions for cell adhesion and proliferation. Approximately 40-60 days following the explant procedure, a confluent monolayer was formed. Cellular morphology in the primary cultures and the subcultures was heterogeneous, but in the monolayer the epithelioid morphology type predominated. A karyotype with a diploid number of six chromosomes (2n = 6) was observed. Isoenzymatic and molecular patterns of the mosquito cell cultures matched those obtained from the immature and adult forms of the same species. Eighteen subcultures were generated. These cell cultures potentially constitute a useful tool for use in biomedical applications.

Aceptabilidad y eficacia de mosquiteros tratados con insecticida de larga duración Olyset® en un área endémica para malaria en Colombia / Acceptability and efficacy of long-lasting insecticidal nets Olyset® in a malaria endemic area of Colombia

En Colombia, el uso de mosquiteros es promovido por el Programa nacional de prevención y control de enfermedades transmitidas por vectores en áreas endémicas para malaria. A pesar de esto, son pocos los estudios realizados para evaluar su efectividad y en particular el grado de aceptabilidad por los usuarios lo cual es fundamental para mantener la adherencia a esta medida de control. En el presente estudio se evaluó, a pequeña escala, la aceptación de mosquiteros impregnados con insecticida de larga duración (Olyset®) y su efecto biológico en mosquitos, en una localidad de la región pacífica colombiana. Se instalaron 100 mosquiteros Olyset® en 30 viviendas con la recomendación, basados en una encuesta previa, de lavarlos mensualmente. Cuatro, ocho y doce meses después, se aplicó una encuesta en donde se determinó la aceptación teniendo en cuenta: el porcentaje de mosquiteros Olyset® en uso y la percepción de protección de los habitantes contra las picaduras de los mosquitos. Además, en la primera encuesta se indagó sobre los posibles efectos secundarios en la salud de los usuarios por el uso de estos mosquiteros. Grupos de hembras criadas en laboratorio de Anopheles albimanus Wiedemann y Culex quinquefasciatus Say fueron expuestos a los mosquiteros cada cuatro meses para determinar el efecto letal.

La proporción de mosquiteros Olyset® en uso fue disminuyendo en cada evaluación: 77,5%, 51,1% y 46,6% a los cuatro, ocho y doce meses, respectivamente. La misma tendencia fue observada en la percepción de protección contra la picadura de los mosquitos: 82,7%, 62% y 46%, respectivamente. La mortalidad de A. albimanus fue de 100%, 77,8%, 78,6% y 43,7% y la de C. quinquefasciatus de 100%, 42,3%, 74,1% y 5,7% a los cero, cuatro, ocho y doce meses de uso de los mosquiteros, respectivamente. Sólo un 5% de los usuarios manifestó irritación de la piel en los primeros días de uso de estos mosquiteros. En conclusión, durante el año de seguimiento se evidenció una disminución gradual en la aceptación de los mosquiteros Olyset®. Esto probablemente debido a que la notable reducción del efecto letal de los mosquiteros permitió un aumento en las tasas de picadura de los mosquitos que ocasionó la deserción de varios de los usuarios. Sin embargo, no se puede descartar que otras causas hayan contribuido a la reducción en la aceptación.

The use of bednets is promoted by the National Program of Promotion and Prevention of Diseases Transmitted by Vectors in malaria endemic areas of Colombia. This study estimated the acceptance and retention of long-lasting insecticide-treated nets (Olyset®). The study also measured the efficacy of the bednets after being washed once a month. Thirty dwellings were chosen in the village of Beté (Chocó department) to receive bednets. Interviews were administered in four month intervals to determine the frequency of bednet use and to assess the health outcomes. Among the recipients, nets were readily accepted and used at the beginning. However, usage began to decline: 77.5%, 51.1% and 46.6% after 4, 8 and 12 months of use respectively. In addition, 5% of recipients reported skin irritation after 15 days of continuous use. Anopheles albimanus and Culex quinquefasciatus females were exposed to used bednets every four months to estimate mortality and knock down rates. Bioassays revealed a decrease in efficacy over time. A. albimanus mortality was 77.8%, 78.6% and 43.7% after 4, 8 and 12 months of use, respectively. Mortality for C. quinquefasciatus was variable. A. albimanus mean knock down percent was above 80% at each sampling period. C. quinquefasciatus mean knock down percent was at a similar >80% at the 4 and 8 month sampling times, however, declined to 5.7% after 12 months of use. One year of use and monthly washings of bednets results in significantly less acceptance among recipients and a decrease in efficacy.

Five new species of Culicoides Latreille described from Colombia, yielding a new species list and country records (Diptera: Ceratopogonidae)

The following five new species of Culicoides from Colombia are described, illustrated and placed to subgenus or species group: Culicoides antioquiensis, Culicoides gabrieli, Culicoides inermis, Culicoides micayensis and Culicoides nigrifemur. C. gabrieli is also known from Peru. When possible, their position in previously published keys is indicated and their features discussed in light of the most recent revisions. A list of 180 Culicoides species known (114) or suspected of being in Colombia (66) is given in a Table. Of these, 12 including the new species are recorded from Colombia for the first time.

Distribución de los vectores de Leishmania infantum (Kinetoplastida: Trypanosomatidae) en Colombia / Distribution of Leishmania infantum vector species in Colombia

Introducción. Debido a la importancia que tiene la vigilancia entomológica como principal medida de control en el manejo de la leishmaniasis visceral, es necesario contar con información actualizada acerca de la distribución y ecología de los insectos involucrados en la transmisión para optimizar las estrategias de prevención. Objetivo. Presentar la distribución actualizada geo-referenciada de L. longipalpis y L. evansi, vectores de los parásitos que causan leishmaniasis visceral en Colombia, teniendo en cuenta la asociación de los insectos con su hábitat. Materiales y métodos. Los registros de distribución se obtuvieron a partir de los ejemplares recolectados en Colombia desde 1967. La información obtenida se organizó en una base de datos a partir de la cual se tomaron las localidades que, posteriormente, fueron sometidas a análisis geográficos por medio de Arc View que se utilizaron para realizar los mapas de distribución. Resultados. Para L. longipalpis se obtuvieron 40 localidades todas distribuidas a lo largo del valle del río Magdalena: Alto (24), Medio (11) y Bajo (5) Magdalena. L. evansi fue registrado en 19 localidades también ubicadas en el mismo valle: cinco en el Magdalena Medio y 14 el Magdalena Bajo. Conclusiones. Ambas especies demostraron una consistente asociación con regiones clasificadas principalmente como bosque seco tropical según las zonas de vida de Holdridge lo que confirma el riesgo epidemiológico de leishmaniasis visceral en estas áreas

Introduction. Since entomological surveillance is the main control strategy for visceral leishmaniasis, updated information on the distribution and ecology of involved vector species is necessary for planning preventive measures. Objective. To present the updated and geo-referenced distribution of L. longipalpis and L. evansi, vectors of visceral leishmaniasis in Colombia, considering their relationship with their habitat. Materials and methods. Distribution was estimated from records of the sand fly specimens collected since 1967.The information was organized in a database from which the localities were selected and geographically analyzed with Arc view in order to develop the distribution maps. Results. 40 localities were established for L. longipalpis along the upper (24), middle (11) and lower (5) Magdalena river valley . L. evansi was recorded in 19 localities of the middle (5) and lower (14) Magdalena valley. Conclusions. Both species showed consistent association with dry tropical forest ( sensu Holdridge 1967), confirming the epidemiological risk for visceral leishmaniasis in these areas.

PCR para la confirmación de trasmisión experimental de Leishmania chagasi a hámster sano por picadura de Lutzomyia longipalpis (Diptera: Psychodidae) / PCR as a tool in confirming the experimental transmission of Leishmania chagasi to hamsters by Lutzomyia longipalpis (Diptera: Psychodidae)

Se evaluó la efectividad de la PCR como herramienta en la detección de la transmisión experimental de Leishmania chagasi a hámster, Mesocricetus auratus, por picadura del insecto vector. Dos pares de hámsteres sanos y anestesiados fueron colocados en jaulas que contenían hembras de Lutzomyia longipalpis. Previamente, las hembras se infectaron experimentalmente con Leishmania chagasi y la infección se confirmó por disección en una submuestra. A los 37 y 51 días después de la exposición a los insectos infectados, las biopsias de hígado y bazo de cada hámster se sometieron a examen directo al microscopio, histopatología y PCR. El ADN se extrajo con Chelex 100(c); en la amplificación se utilizó un par de iniciadores específicos para la región conservada de los minicírculos del ADN de Leishmania. El producto amplificado se separó en geles de agarosa y se visualizó bajo luz UV. En tres de las cuatro biopsias se observó una banda de 120 pares de bases, aproximadamente, correspondiente al tamaño esperado de la fracción del minicírculo. La técnica de PCR fue el único método que detectó la presencia del par sito. Estos resultados demostraron que la sensibilidad de la PCR acelera los procesos de incriminación vectorial de las especies vectoras de leishmaniasis.

Definición de las condiciones de temperatura y almacenamiento adecuadas en la detección de ADN de Leishmania por PCR en flebotominos / Definition of appropriate temperature and storage conditions in the detection of Leishmania DNA with PCR in phlebotomine flies

For epidemiological studies and control programs of leishmaniasis, taxonomic identification of the etiologic agent of the disease in the insect vector is of critical importance. The implementation of molecular techniques such as the polymerase chain reaction (PCR) has permitted great advances in the efficacy and sensitivity of parasite identification. Previously, these investigations involved labor-intensive dissections and required expert personnel. The present work evaluates the effects of storage methods of phlebotomine samples in the optimization of PCR identification of Leishmania. Females of Lutzomyia longipalpis, from the colony of the Instituto Nacional de Salud, were experimentally infected with Leishmania chagasi (= L. infantum), from the upper Magdalena Valley (Quipile, Cundinamarca, Colombia). The infected insects were preserved in three solutions: 100 ethanol, 70 ethanol, and TE; subsamples of each class were stored at -80 degrees C, -20 degrees C and room temperature. To determine infection rates, samples were dissected and screened microscopically. Chelex 100 was used for extraction of total Leishmania DNA. For PCR amplification, the kinetoplastic minicircle DNA primers OL1 and OL2 of Leishmania were used, and the products were visualized by electrophoresis in 1 agarose gels. For each of the 3 storage conditions, amplifications were successful, producing a approximately 120 base pair product unique to Leishmania. The results demonstrated the advantage of PCR as a routine screening method for detecting infected flies in endemic foci of visceral leishmaniasis. Since storage method did not affect PCR amplification success, the most cost effective method -70 ethanol at room temperature--is the option recommended for storing entomological samples in vector incrimination studies.

Ciclo de vida y colonización de Lutzomyia ovallesi (Diptera: Psychodidae) vector de Leishmania spp. en América Latina / Life cycle and colonization of Lutzomyia ovallesi (Diptera: Psychodidae), vector of Leishmania spp. in Latin America

Lutzomyina ovallesi (Diptera: Psychodidae), presente en un foco de Leishmania (V) braziliensis en Reventones, Cundinamerca, región ubicada en el centro de Colombia, se crió y mantuvo por catorce generaciones bajo condiciones de laboratorio con una temperatura diaria entre 22-28ºC y una humedad relativa entre 90 y 98 por ciento. Después de la emergencia, se llevaron machos y hembras a vasos de poliestireno (transparente) y se mantuvieron en una nevera de icopor. La duración de cada uno de los estadios del ciclo de vida observado en las crías individuales fue: huevo 9-12 días (promedio = 10,42, DE = 0,86); larva l 7-11 días (promedio = 9,9, DE=3,06); larva II 7-13 días (promedio = 9,5, DE= 3.06); larva III 4.12 (promedio 0 7,4, DE = 1,50); larva IV 9-19 días (promedio = 15, 16, DE = 2,66) y pupa 8- 16 (promedio = 11, DE= 1,89). El tiempo promedio para el desarrollo total del ciclo biológico fue de 63,36 días. La longevidad para las hembras presentó un rango entre 5 y 10 días (promedio = 9.36) y para los machos entre 4 y 13 días (promedio = 7,44). Con respecto a la productividad registrada a partir de un promedio de 30 hembras de Lutzomyia por vaso de cría, se obtuvo una producción mínima de 260 flebótomos en la quinta generación y una máxima de 4.511 en la décimotercera generación